[1][2] Esta enzima tiene preferencia para actuar sobre ADN de doble cadena, generando una muesca o corte simple sobre la cadena dañada, más precisamente en dirección 5' con respecto al sitio dañado, generando dos extremos uno hidroxi-3' y uno fosfato-5' este último proximal al dímero.
Otros nombres por los cuales se conoce a esta enzima son endodesoxirribonucleasa V de bacteriófago T4 y T4 endonucleasa V.
El ADN expuesto a radiación ultravioleta sufre varios tipos de alteraciones químicas que pueden alterar de forma inesperada la información que contiene.
Para evitar este tipo de daños que la mayor parte de las veces pueden resultar deletéreos, casi todos los organismos poseen mecanismos de reparación del ADN, la desoxirribonucleasa (dímero de pirimidina) forma parte del mecanismo de reparación del ADN en algunas bacterias y en el fago T4, esta enzima genera una muesca en la cadena de ADN afectada, permitiendo luego que otras enzimas puedan remover el nucleótido afectado y reconstruir la porción afectada.
[3] La enzima actúa en forma secuencial: NOTA: La enzima tiene preferencia para actuar sobre ADN bicatenario, aunque se ha representado solo una de las cadenas por motivos de claridad .