Este potencial negativo se genera por la presencia en la membrana de bombas sodio/potasio (que extraen de forma activa 3 iones Na+ (sodio) desde el interior hacia el exterior celular e introducen 2 iones K+ (potasio), consumiendo 1 molécula de ATP), canales para el potasio (que permiten el intercambio libre de los iones K+) y bombas para Cl- (que extraen cloro de forma activa).
Como resultado, el exterior celular es más rico en Na+ y Cl- que el interior, mientras que los iones K+ se acumulan en el interior respecto al exterior.
La diferencia de potencial dentro y fuera de la célula no es porque salen 3 cargas positivas (Na+) y entran solo 2(K+), en realidad el balance entre iones positivos y negativos es siempre cero, la diferencia de potencial se crea debido a que los iones Sodio atraen con más fuerza a los electrones que los iones Potasio, por tanto fuera de la célula se tiende a tener mayor afinidad electrónica que dentro, eso crea una tendencia a que los electrones fluyan hacia afuera lo que crea una diferencia de potencial eléctrico que físicamente puede ser medido.
Si la despolarización alcanza un determinado valor umbral, se genera un potencial de acción.
Este proceso forma parte de la transmisión sináptica.