En 1951 se inició como actriz teatral, tras finalizar con provecho sus estudios de interpretación en la Accademia Nazionale d'Arte Drammatica, en la cual tuvo como profesores a Orazio Costa y Wanda Capodaglio.
Michelangelo Antonioni la eligió en 1959 para interpretar a Patrizia en el film La aventura, comenzando así una discontinua carrera en el mundo del cine, en el cual trabajaría hasta el año 1987.
Además, participó también en diversos programas culturales y teatrales, así como en comedias y dramas emitidos por la RAI.
Esmeralda Ruspoli falleció en 1988 en Lipari, Italia.
Había estado casada con el actor Giancarlo Sbragia, con el cual tuvo tres hijos: Mattia Sbragia, también actor, Viola y Ottavio.